大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）酶聯(lián)免疫檢測 試劑盒使用說明書 使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。 用 途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）的測定。 工作原理 本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）水平。向預(yù)先包被了大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1），溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗SDF-1抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）的濃度呈正相關(guān)。 試劑盒組成 | 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 | | 說明書 | 1份 | 1份 | | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | | 酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 | | 標(biāo)準(zhǔn)品：2400ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | | 鏈霉親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | | 生物素標(biāo)記的抗SDF-1抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 | | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 | 需要而未提供的試劑和器材 1． 37℃恒溫箱。 2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。 3． 精密移液器及一次性吸頭 4． 蒸餾水， 5． 一次性試管 6． 吸水紙 注意事項 1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差 3． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 4． 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。 5． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 6． 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。 自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中 標(biāo)本要求 1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 操作程序 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。） | 1200 ng/L | 5號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | | 600 ng/L | 4號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | | 300 ng/L | 3號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | | 150 ng/L | 2號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | | 75 ng/L | 1號標(biāo)準(zhǔn)品 | 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 2. 根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。 3. 加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗TNF-α抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加）；3）代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗TNF-α抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘. 7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 8. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 9. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。 操作程序總結(jié)： 準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品 |
加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，生物素標(biāo)記的二抗和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘 |
檢測范圍：30ng/L→1200 ng/L。 規(guī)格：96T/盒 保存：2-8℃。 有效期：6個月（2-8℃）。 |
