在生物實(shí)驗(yàn)室、臨床檢測(cè)中,ELISA實(shí)驗(yàn)是出鏡率普遍的“檢測(cè)能手"——小到新冠抗體檢測(cè)、過(guò)敏原篩查,大到蛋白定量、病毒抗原檢測(cè),都離不開它的身影。它全稱酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),核心優(yōu)勢(shì)是靈敏、特異、操作簡(jiǎn)便,能精準(zhǔn)捕捉微量的蛋白質(zhì)、抗原、抗體等物質(zhì)。ELISA實(shí)驗(yàn)根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)(抗原或抗體)的不同,主要分為4種常見類型,日常的是前兩種,核心邏輯一致,只是“捕捉"和“檢測(cè)"的順序不同,下面用通俗的語(yǔ)言,帶大家輕松分清這4種類型。
1. 間接法:主要用于檢測(cè)“抗體",比如臨床中檢測(cè)人體是否有新冠抗體。操作邏輯是先把抗原固定在載體上,再加入待檢測(cè)樣品(含抗體),讓樣品中的抗體與載體上的抗原特異性結(jié)合,隨后加入帶酶的二抗,最后通過(guò)酶催化底物顯色,判斷抗體是否存在。
2. 雙抗體夾心法:主要用于檢測(cè)“抗原",比如檢測(cè)樣品中是否有新冠病毒抗原。先把第一種抗體固定在載體上,加入待檢測(cè)樣品(含抗原),讓抗原與固定抗體結(jié)合,再加入第二種帶酶的抗體,形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"的夾心結(jié)構(gòu),最后通過(guò)顯色反應(yīng)檢測(cè)抗原含量。
3. 競(jìng)爭(zhēng)法:適用于檢測(cè)小分子抗原,比如激素、藥物等。其核心是待檢測(cè)抗原與已知的酶標(biāo)抗原,競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固定在載體上的抗體,結(jié)合的酶標(biāo)抗原越多,最終顯色越淺,反之則顯色越深,通過(guò)顏色深淺判斷小分子抗原的含量。
4. 捕獲法:主要用于檢測(cè)IgM抗體,可幫助判斷機(jī)體近期是否感染病原體。操作時(shí)先固定抗IgM抗體,用于捕獲樣品中的IgM抗體,再依次加入抗原、酶標(biāo)抗體,最后通過(guò)顯色反應(yīng),確定IgM抗體的存在及含量。
二、核心試劑
1. 抗原 / 抗體類:對(duì)應(yīng)檢測(cè)目標(biāo)的特異性抗原、特異性抗體(如雙抗體夾心法需兩種抗體,捕獲法需抗 IgM 抗體)、酶標(biāo)二抗(連接催化顯色的酶,如辣根過(guò)氧化物酶 HRP 標(biāo)記二抗)。
2. 顯色相關(guān)試劑:底物液(如 TMB 底物、OPD 底物,與酶匹配)、終止液(如硫酸,終止顯色反應(yīng),避免信 號(hào)過(guò)強(qiáng))。
3. 輔助試劑:包被緩沖液(用于固定抗原 / 抗體,如碳酸鹽緩沖液)、封閉液(如牛血清白蛋白 BSA、脫脂奶粉,防止非特異性結(jié)合)、洗滌液(如含吐溫 - 20 的 PBS 緩沖液,洗去未結(jié)合的游離試劑)。
三、實(shí)驗(yàn)耗材
1. 酶標(biāo)板(ELISA 專用,常用 96 孔 / 384 孔,用于抗原 / 抗體固定、反應(yīng)孵育)。
2. 一次性耗材:移液器吸頭(適配不同量程,避免交叉污染)、離心管(用于試劑稀釋、樣品分裝)、移液管 / 巴氏吸管(試劑轉(zhuǎn)移)。
四、輔助工具
酶標(biāo)儀(讀取顯色后的吸光度 OD 值)、恒溫孵育箱(控制孵育溫度,保障抗原抗體結(jié)合效率)。
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